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羧肽酶B活性(54)

所需的材料

1. Tris buffer; 0.2 M pH 7.7在25°C下制备,含0.2 M NaCl.

2. Substrate solution; 2.0 mM. 68年解散.0 mg海马尾精氨酸,100ml水. 加热至约50°C,必要时搅拌加速溶解. 冷却至室温. 每天准备新鲜食物. 保持冰敷.

3. Enzyme solution; dissolve 0.tris缓冲液中1mg /ml. 保持冰敷.

过程

1. 将分光光度计调至254 nm,细胞温度调至25°C

2. 混合1.5 ml三色缓冲液和1.在细胞中加入5ml底物溶液. 平衡至25°C

3. 加入20 μl CPB溶液, 混合并测定吸光度的增加速率, 每隔30秒,每次3分钟. 计算 距离初始线性反应254nm/min.

比活度计算

Î, 1%, 280 = 21.2mg /ml=A280 × 0.472卷= 3.2 ml A= 254 nM T= 25℃
光路= 1.0 cm
0.349 = pH值为7时,1mm马尿酸的吸光度增加.7

单位  =  ∆A/min x 3.02 ml
mg          0.349 x 0.002 mg

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