所需的材料
1. Tris buffer; 0.2 M pH 7.7在25°C下制备,含0.2 M NaCl.
2. Substrate solution; 2.0 mM. 68年解散.0 mg海马尾精氨酸,100ml水. 加热至约50°C,必要时搅拌加速溶解. 冷却至室温. 每天准备新鲜食物. 保持冰敷.
3. Enzyme solution; dissolve 0.tris缓冲液中1mg /ml. 保持冰敷.
过程
1. 将分光光度计调至254 nm,细胞温度调至25°C
2. 混合1.5 ml三色缓冲液和1.在细胞中加入5ml底物溶液. 平衡至25°C
3. 加入20 μl CPB溶液, 混合并测定吸光度的增加速率, 每隔30秒,每次3分钟. 计算 ∆距离初始线性反应254nm/min.
比活度计算
Î, 1%, 280 = 21.2mg /ml=A280 × 0.472卷= 3.2 ml A= 254 nM T= 25℃
光路= 1.0 cm
0.349 = pH值为7时,1mm马尿酸的吸光度增加.7
单位 = ∆A/min x 3.02 ml
mg 0.349 x 0.002 mg